1b: Kolonietelling van een gistsuspensie

• Biologie
• MBO
• Studiejaar 1

Kolonietelling

Doel

Bepalen hoeveel levende gistcellen er in één ml gistsuspensie zitten.

Principe

1. Decimale verdunningsreeks maken met het monster, hierbij moet steriel gepipetteerd worden.
2. Steriel uitplaten op giet-, en spreidplaten.
3. Tellen van het aantal kolonies en het berekenen van het kiemgetal

1. Decimale verdunningsreeks

2. Steriel uitplaten

Verdunningsreeks en gietplaten maken

Spreidplaten maken

3. Tellen en berekenen van het kiemgetal

• Tel alle platen (>300 zijn niet te tellen (n.t.t.))
• Bereken het kiemgetal van alle platen tussen de 130-300 kolonies (betrouwbaar)
• Bereken het gemiddelde kiemgetal van de betrouwbare platen in KVE/ml  (Kolonie Vormende Eenheden/ml)
• Kiemgetal= kolonies x verdunningsfactor x omrekenfactor

Opdracht

Lees nu practicum 1b door in het dictaat en ga dan verder met de LessonUp

Wat bedoelen we met decimaal bij de verdunningsreeks?

Waarom moet je steriel pipetteren?

Waarom moet je elke buis homogeniseren?

Waarom gebruiken we fysiologische zoutoplossing voor het verdunnen?

Water

In water gaat de gist dood en kun je geen kiem-getal meer bepalen

Ik tel 68 kolonies uit de 10^-5 verdunning en heb 0,1 ml uitgeplaat. Bereken het kiemgetal.

Kiemgetal

Om terug te rekenen naar de originele concentratie van het monster houdt je rekening met de verdunningsfactor en de omrekenfactor.

Verdunningsfactor=aantal keer verdund in de decimale verdunningsreeks (dit is dus altijd een macht van 10, zie slide 5)

Omrekenfactor= waarmee je moet vermenigvuldigen om weer naar 1 ml te komen (bij 0,1 ml uitplaten dus een factor 10)

Voorbereiden

1. Doel
2. Principe 
3.  Proef in beeld (tekeningen!)
4. Benodigdheden
5. Afval stromen

Waarom gebruiken we moutagar in plaats van nutriëntagar?

Hoe kun je zien of je de verdunningen nauwkeurig hebt gepipetteerd?

Stel je ziet na het incuberen verschillende typen kolonies op 1 plaat. Wat kan dat betekenen?

Wat is de omrekenfactor wanneer je 500 microliter hebt uitgeplaat op de spreidplaten?