Bonte rij

• Biologie
• MBO
• Studiejaar 3,4

Bonte rij

Uitleg SLB taak: Samenvatting en bronnenonderzoek

Buis 1: DSI

Buis 2 LDC

Welke 3 hoofdstappen neem je om een micro-organisme te kunnen identificeren?

Identificatie met een bonte rij

Onder welke van de 3 hoofdstappen valt de bonte rij?

Wat heb je nodig voordat je deze 3 stappen kunt uitvoeren?

Wat bedoelen we met de "biochemisch eigenschappen" van het micro-organisme?

Bonte rij

Bonte rij wordt gebruikt voor de identificatie van gram-negatieve bacteriën

• Darmbacteriën zijn Enterobacteriaceae
  
• Determineren van bacteriën
  
• Waarom wordt dit de “Bonte rij” genoemd?
  

De buizen van de bonte rij 

1. DSI
2. LDC
3. ODC
4. Peptonwater
5. Ureum
6. Inositol

1: DSI (Double Sugar Iron)

Vast, rood/oranjeachtig medium met schuinoppervlak

• Rechte streep met steekent
  

Bevat:

• 2 suikers (glucose en lactose 1:10)
  
• pH indicator (fenolrood)
  
• Neutraal=rood
  
• Zuur=geel
  
• Basisch=roze
  
• Na₂S₂O₃ en IJzercitraat
  

DSI buis

5 eigenschappen:

Glucose fermentatie (alleen gele stomp)

• Bij glucosefermentatie ontstaan zure producten pH indicator roodgeel
  

Lactose fermentatie (hele buis geel)

• Bij lactosefermentatie ontstaan zure producten pH indicator roodgeel
  

Zwerming (groei over gehele oppervlak)

• Mo kan voortbewegen over het oppervlak met flagellen
  

Zwavelreductie (zwart neerslag)

• Reductie van NaS₂O₃ waarbij H₂S gas vrij komt. Het Fe uit Ijzercitraat reageert met de S tot FeS (zwart)

Gasvorming (gasbellen/scheuren)

Ontstaan bij de vergisting van suikers (CO2 en H2)

2 LDC buis (Lysinedecarboxylase)

Paars, vast medium, schuin gestold

Beenten met slingerent en steekent

Bevat:

• Lysine (aminozuur)
  
• Indicator (Broom Cresol Purper)

• Ijzer-ammoniumcitraat
  

Is paars in basische omgeving

Is geel in zure omgeving

LDC buis

Eigenschappen:

Bevat het enzym lysinedecarboxylase (paarse stomp)

• CO₂ wordt afgesplitst van COOH groep en ontsnapt uit de buis. Wat overblijft is basisch, de indicator wordt paars in de stomp.
  

Bevat het enzym lysinedeaminase (rood oppervlak)

• NH₂-groep wordt afgesplitst en omgezet tot NH₃⁺. Dit reageert met ijzer-ammoniumcitraat tot een zuur product bij het oppervlak.

Vraag: Welke reactie aeroob en welke reactie is anaeroob?

Reactie 1 in de stomp is anaeroob en reactie 2 aan het oppervlak is aeroob

Vandaag

Korte herhaling DSI en LDC

Theorie buis 3: ODC

Theorie buis 4: Peptonwater

Buis 3: ODC (Ornithinedecarboxylase)

Halfvast medium met paars/gele kleur

Steekent

Bevat:

• Ornithine (aminozuur)
  
• Indicator Broom Cresol Purper
  

Paars in basisch milieu en geel in zuur milieu

ODC

Eigenschappen:

Bezit van het enzym ornithinedecarboxylase (anaeroob)

• Decarboxylase wat zegt dat ook alweer?
  
• CO₂ wordt afgesplitst van COOH groep. Het basische restproduct blijft paars
• Negatieve buis wordt geel door verzuring tgv. glucosefermentatie

Beweeglijkheid

Groei naast de steeklijn (aftakkingen of troebel)

Zouden aerobe mo beweeglijkheid laten zien?

Buis 4: peptonwater

Vloeibaar medium (Hoe beenten?)

Bevat:

Tryptofaan (aminozuur)

Eigenschap:

Bezit van het enzym tryptofanase

Wordt afgelezen mbv Kovac's reagens

 

para-dimethylbanzaldehyde (indicator)

Drijft op het medium omdat Kovac's butanol bevat.

Vormt een rood complex met indol 

Blijft geel zonder indol

Het enzym tryptofanase zet het aminozuur tryptofaan om in indol en pyruvaat

Vandaag

Korte herhaling

Theorie buis 5: Ureum agar

Theorie buis 6: Inositol-medium

Herhaling buis 1 en 2

• Waarvoor wordt Bonte rij gebruikt?
  
• Welke buizen bevat de Bonte rij?
  
• Waar let je op voordat je de buizen af kunt lezen?
  
• Wat zie je bij de DSI buis wanneer de bacterie glucose en lactose kan fermenteren?
  
• Welke reactie katalyseert het enzym lysinedeaminase?
  

Herhaling buis 3 en 4

ODC

• Waar staat ODC voor?
  
• Wat zie je aan de buis wanneer de bacterie ODC negatief is?
  
• Waarom is ODC een halfvast medium?
  

Peptonwater

• Waarom wordt kovacs-reagens toegevoegd?
  
• Waarom blijft kovacs-reagens boven op peptonwater drijven?
  
• Welke eigenschap test je hier?
  
• Hoe ziet een positief resultaat eruit?
  

Buis 5: Ureumagar

Vast, geel medium met schuin oppervlak

Alleen slingerent, zigzagent met een steeköse

Bevat:

• Fenolrood (indicator)
  
• Ureum

Eigenschap: Bezit van urease

Ureum wordt omgezet tot ammoniak (NH₃) en CO₂. Dit wordt weer omgezet tot ammonia (NH₄⁺) wat basisch is, waardoor de buis roze kleurt.

Rood in basich milieu en roze bij een pH>8,1

Zuur in een zuur milieu

Buis 6: Inositol medium

Vloeibaar medium met rode kleur (Hoe beenten?)

Bevat: 

Inositol (koolhydraat)

Fenolrood als indicator

Eigenschap: fermentatie van inositol 

Wat betekent fermentatie?

Wat ontstaat hierbij?

Kleurt rood in basisch milieu

Kleurt geel in zuur milieu

Koolhydraat fermentatie

Herhaling Leerjaar 1

Waar begin je mee voordat je een buis kunt aflezen?

Wat is het doel van de bonte rij?

Hoe ziet een DSI buis eruit met een positieve reactie voor zwavelreductie?

LDC knipt

LDA knipt

ODC knipt

Lees de drie LDC buizen af.

Wanneer slaat fenolrood om van rood naar geel?

1. In een zuur milieu
2. In een basisch milieu

Wat heeft een bacterie nodig om te kunnen zwermen?

1. Pili
2. Halfvast medium
3. Bouillon
4. Flagel

Welke eigenschap van de bacterie toon je aan in de indolbuis?

Waarom neem je een positieve en een negatieve controle mee?