C&W Digi les 22-03-2022

• Biologie Laboratoriumtechniek
• MBO
• Studiejaar 3

Cel en Weefselkweek

Week 8 

digitale les 22-03-22

M. Moeskops

Plan

Presentaties (3x)

Uitleg Celkweek vs. weefselkweek

Uitleg limiting dilution

Celkweek:

Een homogene kweek van één celtype in de vorm van een monolayer of celsuspensie.

Weefselkweek:

Het handhaven van groei van weefsels van (een deel van) een orgaan in vitro zonder dat de structuur en functie verloren gaat. Bevat meerdere celtypen.

Voordelen weefselkweek

Geen of langzame groei (geen subculturen)

Voordeel:

structuur blijft behouden (3D)

cel-cel interacties blijven behouden

eigenschappen blijven behouden (bv. hormoonproductie)

Voorbeeld weefselkweek

Voordelen Celkweek

H8: Typen celkweek

1. primaire kweek
   
2. semi-permanente cellijn
   
3. permanente cellijn
   

Primaire kweek

1 voor en 1 nadeel primaire celkweek

Waarom primaire cellen?

Reageren beter op stimuli

Lijken meest op situatie in organisme

Genoom van patient

Nadelen primaire cellen?

Weinig passages; steeds opnieuw isoleren

Snel infectie

Risico’s van aanwezigheid virussen etc.

Heterogene populatie

Soms feedercellen nodig

Semi-permanente cel lijnen

Ongeveer 50 passages houdbaar

Cellen enigszins gedifferentieerd

Na differentiatie contactinhibitie: groei-remming als ze elkaar raken

Permanente cellijnen

• Altijd door te kweken
• Korte delingstijd 12-20 uur
• Weinig specifieke mediumbehoefte (laag/zonder serum)
• Cellen vertonen geen/weinig contactinhibitie
• Cellen vertonen geen ruimtelijke oriëntatie meer
• Cellen kunnen sterk worden doorverdund (kunnen zelfs gekloneerd worden, 1 cel gebruiken voor een nieuwe kweek)

Als permanente cellijnen niet zo representatief zijn voor organismen, waarom worden ze dan toch zoveel gebruikt?

1. eiwitproductie
2. virusproductie
3. Zijn feedercellen voor andere cellen
4. makkelijk werken weegt in eerste instantie op tegen minder representatief
5. Goedkoper
6. Stevig, dus makkelijk genetisch te modificeren. Inbrengen vreemd DNA, dan limiting dilution uitvoeren
7. Oneindige groei
8. 
   

GFP producerende COS-1 cellen

Stel, je wil COS-1 cellen GFP laten aanmaken.

Stel je wil COS-1 cellen GFP laten aanmaken. Hoe kun je dit voor elkaar krijgen?

Retrovirus bouwt zijn eigen 

DNA in bij dierlijke cellen

Hoe ga je de 

beste GFP 

expressie cellen 

uitselecteren?

Verdunnen cellen. Totdat je in 1 well 1 kolonie vindt. Deze checken op GFP expressie en passeren in nieuwe fles

Deadline Generatietijd verslag

1 april 23:59