Practicum 2a: Totaal eiwit bepaling en 2b DNA uit kiwi

• Biologie
• MBO
• Studiejaar 1

Practicum 2a

Totaal eiwitgehalte in serum

Wat zijn de bouwstenen van eiwitten ook al weer?

1. Sachariden
2. Lipiden
3. Aminozuren
4. Nucleotiden

Welke functies kunnen eiwitten hebben in je bloed?

Functies van eiwitten

• Enzymen
• Bouwstoffen, b.v.spieren, haar, nagels, collagene vezels ...
• Hormonen b.v. insuline
• Antistoffen
• Receptor: eiwitten met vaak suiker eraan vast in celmembranen
• Transport: eiwitten in celmembranen die stoffen doorlaten
• Als reservestof in plantzaden en eiwit van eieren

Met welke indicator kun je eiwit aantonen?

1. Benedict
2. Biureet
3. Soedan III
4. DCPIP

Eiwit+biureet

Links: + reactie

Rechts: - reactie

De Cu²⁺-ionen uit biureet binden aan de peptidebindingen van het eiwit.

Wat verwacht je bij een hogere concentratie eiwit?

1. Licht paarse kleur
2. Donker paarse kleur
3. Blauwe kleur

Wat voor extinctie verwacht je bij een hoge eiwit concentratie?

1. Hoge extinctie
2. Lage extinctie
3. Geen idee

Uitvoering deel 1

1. Welke vloeistoffen bevatten eiwit?
2. Waarom pipetteren we in duplo?
3. Wat is een standaard?

Je moet 0,1 ml toevoegen, hoeveel microliter is dat?

1. 1 microliter
2. 10 microliter
3. 100 microliter
4. 1000 microliter

Let op:

-Alle vloeistoffen goed homogeniseren, eiwit zakt snel uit

-Neem de juiste pipetman en puntjes die goed passen

-Spoel de pipetpunt voor met de vloeistof de je gaat pipetteren

-Homogeniseer nogmaals voor het overbrengen in de cuvet

-Noteer in welk afvalvat de vloeistoffen moeten

Voorbereiding

Meenemen naar de les in een practicum schrift

Vergeet niet: voorbereidende vragen, benodigde hoeveelheden en het afval.

Uitwerking

1. -Download het format meetrapport bij het inleverbakje in Cumlaude
2. -Maak in excel een ijklijn met de extincties van de blanco en de standaarden en kopieer deze in je meetrapport.
3. -Kijk naar de feedback bij je meetrapport glucose
4. -Inleveren in Cumlaude

Practicum 2b:

DNA isolatie uit kiwi

Wat betekent: DNA isolatie?

Waar bevindt zich het DNA in een plantencel?

1. In de kern
2. In het cytoplasma
3. In de vacuole
4. In plasmiden

Welke barrières zitten er tussen jou en het DNA van de kiwi?

Te doorbreken barrières

1. Celwand: bestaat voornamelijk uit cellulose (polysacharide)
2. Celmembraan: bestaat uit fosfolipiden (vetten)
3. Kernmembraan: bestaat uit fosfolipiden (vetten)

Hoe zou je elk van deze barrières kunnen doorbreken?

Barrière 1 doorbreken: celwand

Dit kan bijvoorbeeld door:

• Verhitten
• Met behulp van enzymen
• Met de blender

Barrière 2 en 3: membranen

Barrière 2 en 3 doorbreken:

De celmembraan en de kernmembraan breken we af met zeep.

En nu?

Het DNA zit in een "soep" van organellen, vetten en eiwitten.

Stappenplan

1. Voeg zout toe om alle eiwitten neer te laten slaan. 
2. Filtreer de grove stukken en eiwit eruit met een panty
3. Voeg ijskoude alcohol toe om het DNA neer te laten slaan
4. Het DNA is nu uit de oplossing te halen met een glazen staafje

Voorbereiding

-Meenemen in je practicumschrift

-Denk ook aan de voorbereidende vragen de benodigde hoeveelheden

-Je maakt de uitwerking hiervan pas bij practicum 3b