oefening enzymen wk 3 les 2

• klinische chemie
• MBO
• Studiejaar 2

herhaling enzymen

week 3 les 3

Geef de algemene reactievergelijking die gekatalyseerd wordt door een enzym

+

+

E

S

ES

E

P

EP

SP

Aan welke voorwaarde moet worden voldaan om een enzymatische reactie optimaal te laten verlopen?

1. optimale temp, pH, conc. substraat, aanwezigheid co-factor, afwezigheid enzymremmers
2. optimale temp, pH, conc. substraat, afwezigheid co-factor, aanwezigheid enzymremmers
3. optimale temp, conc. substraat, aanwezigheid co-factor, afwezigheid enzymremmers
4. optimale temperatuur, pH, aanwezigheid co-factor, afwezigheid enzymremmers

Waarom wordt aan een substraat altijd een buffer toegevoegd bij een activiteitsbepaling van een enzym?

Waarom wordt aan een substraat altijd een buffer toegevoegd bij een activiteitsbepaling van een enzym?

Een buffer zorgt voor het juiste milieu voor het bepalen van de enzymactiviteit:

De optimale pH

Waarom wordt er altijd een overmaat aan substraat toegevoegd?

Waarom wordt er altijd een overmaat aan substraat toegevoegd?

Bij een voldoende hoge concentratie substraat is de reactiesnelheid van de enzymreactie optimaal:

door de overmaat werkt het enzym maximaal wat leidt tot de Vmax

Voor de ALAT-activiteit in het serum van Dhr. van Zande pipetteert men in een cuvet:

           · 1,8 ml reagensoplossing

           · 200 µl serum (incuberen)

           · 10,00 ml stopreagens

De extinctie van het gevormde product wordt gedurende 15 min. gemeten bij 400 nm en is een maat voor de AF-activiteit. Deze extinctie is 0,450 en de mol.ext.coeff. van dit product is 9450 mol.L-1. cm-1.

Bereken de enzymactiviteit

De ALAT-activiteit van dhr v Zande is:

3 U/L

190 U/L

187 U/L

170 U/L

12 U/L

Voor de LDH bepaling pipetteer je in een cuvet:

         *  3,20 ml buffer/substraat oplossing 

         *  200 µl serum 

         *  mengen, gedurende 3 min. de extinctie-toename meten bij een 340 nm

Geef de volledige berekening van de factor om de activiteit te kunnen berekenen

(Gegeven: ε340 nm NADH : 8450 l/mol/cm )

Bereken de LDH- activiteit m.b.v. de berekende factor.

vraag a: wat is de verdunningsfactor?

vraag b: wat is de LDH activiteit?

 

Tijd (s)	Ext
30	0.279
60	0.318
90	0.358
120	0.399
150	0.440
180	0.469
210	0.499

Wat is de verdunningsfactor?

verdunningsfactor Fvv

3,2 ml + 0,2 ml = 3,4 ml totaal

Fvv = 3,4 ml : 0,2 ml = 17

17x verdunnen

Wat is de LDH activiteit?

LDH activiteit

dE/ dt = (0.039+0.040+0.041+0.041) / 2 = 0.161 / 2 = 0.0805 

dE/dt = 0.081/min

 

Wet van Lambert –Beer: E = ε x c x l

0.0805 = 8450 x c x 1

c = 0.0805 / 8450 = 9,58 x 10e-6 umol x Fvv = 9,58 x 10e-6 x 17 = 163 umol/L/min

LDH activiteit = 163 U/L

Welke verschillende enzymen in de klinische chemie kunnen een indicatie zijn om te bepalen of bijvoorbeeld hart, lever, pancreas etc. goed functioneren?

verschillende enzymen

Voor de enzym bepaling pipetteer je in een cuvet:

         *  3 ml buffer/substraat oplossing 

         *  150 µl serum 

         *  mengen, gedurende 4 min. de extinctie-toename meten bij een 340 nm

Geef de volledige berekening van de factor om de activiteit te kunnen berekenen

(Gegeven: ε340 nm = 6300 l/mol/cm )

Bereken de enzym - activiteit m.b.v. de berekende factor.

vraag a: wat is de berekende  verdunningsfactor?

vraag b: wat is de enzym activiteit?

 

Tijd (s)	Ext
30	0.322
60	0.351
90	0.381
120	0.409
150	0.438
180	0.466
210	0.493
240	0.517
270	0.540

Wat is de verdunningsfactor?

Wat is de enzym activiteit?

Voor de ALAT-activiteit in het serum van Mevr. van ieder, pipetteert men in een cuvet:

    · 3,5 ml reagensoplossing

    · 100 µl serum

De extinctie van het gevormde product wordt gedurende een aantal minuten gemeten bij 400 nm en is een maat voor de AF-activiteit. de mol.ext.coeff. van dit product is 7445 mol.L-1. cm-1.

 De gevonden extincties zijn:

t = 60 sec  --> E = 0,246

t = 270 sec --> E = 0,357

 

Bereken de ALAT-activiteit 

De ALAT-activiteit van mevr v ieder is:

153 U/L

121 U/L

324 U/L

Huiswerkopgaven (komt in Teams te staan):

( deze maken voor de komende les, maandag 7 maart)

Wat is het voordeel van een kinetische meting tov een eindpuntsmeting?

Wat is het verschil tussen een directe bepaling en een indirecte bepaling?

Wanneer kies je (/moet je kiezen) voor een indirecte bepaling

Leg het begrip, indicatorreactie uit.

Lezen 5.3.2, 5.4, 5.5 en 5.6 -->  pagina 68 tot en met 76

Exit:

5 korte vragen over de les