PCR

• Biologie
• Middelbare school
• vwo
• Leerjaar 5

Polymerase Chain Reaction

Polymerase chain reaction

techniek om DNA te vermeerderen

Meer DNA is makkelijker te zien

Gaat vooraf aan elke DNA analyse!

Wat kun je met DNA-analyse
onderzoeken?

DNA analyse

Ouderschapsbepaling

Forensische wetenschap

Levensmiddelenonderzoek

Identificeren ziekteverwekker

Je gaat DNA heel vaak kopiëren. Welke enzymen verwacht je nodig te hebben?

Principe

1. Denaturatie: strengen splitsen (90 C)
   in plaats van helicase
   
   
2. Hybridisatie: aanhechten RNA-primers (60 C)
   zijn toegevoegd aan oplossing met DNA
   
   
3. Elongatie: repliceren DNA (70 C)

Polymerase repliceert vanaf primer

Je begint met 1 dubbelstrengs sliertje DNA. Hoeveel sliertjes heb je na 5 PCR cycli?

1. 5 sliertjes
2. 10 sliertjes
3. 32
4. 64

Hoeveel sliertjes heb je na 30 cycli? (Ongeveer 3 uur)

Opstelling

90 - 60 - 70 - 90 - 60 - 70 - 90 etc

In het cupje gaat het DNA fragment dat gekopieerd moet worden. Wat moet er nog meer in?

Nodig

DNA fragment

DNA nucleotiden met drie fosfaatgroepen (dATP, dTTP etc)

DNA-polymerase

Primase

RNA-primers

(pH buffer)

Polymerase Thermus aquaticus

Waarom 90 graden ipv helicase?

Na PCR...