ELISA

• ELISA
• MBO
• Studiejaar 3

Beste studenten

Vorige week heeft een klasgenoot lesgegeven over een bepaalde ELISA. Nu gaan jullie oefenen

Naar aanleiding van wat ik al weet over ELISA wil ik:

1. meer weten over het verschil tussen directe/indirecte ELISA
2. meer weten over de competitieve ELISA
3. Algemene ELISA
4. meer weten over de sandwich ELISA

Beste studenten

Nu gaan jullie je kennis testen d.m.v. oefeningen. De oefeningen zijn onderverdeeld in kleuren. Elke kleur staat voor een bepaald type ELISA. Kies de oefeningen met kleurlabel dat bij de ELISA hoort waarvan jij je kennis wil testen. Zorg dat je zoveel mogelijk oefeningen hebt gemaakt! Bij twijfel begin met de kleur groen.

Groen= Algemene ELISA

Blauw= sandwich ELISA

Rood= competitieve ELISA

Paars= Indirecte ELISA

Lees de paragraaf ELISA op pagina 187-188 uit je biologieboek

Antigeen

Antilichaam

Een stof die in staat is een immunologische reactie op te roepen

Ander woord voor Immunoglobulinen  of antistof

In de wand van B-lymfocyten of los in de lichaamvloeistoffen

In de tekst zeggen ze: ', voegt men vervolgens een tweede antilichaam met enzymlabel toe.' Hoe wordt zo'n tweede antilichaam met een enzymlabel genoemd? En spreken ze hier van een direct of een indirecte ELISA? en waarom?

Hoe komt het dat eiwitten kunnen hechten aan de bodem van de microtiterplaat? Zoek eventueel op internet.

1. Dit komt door een elektrofiele additie reactie van eiwitten
2. Dit komt door een nucleofiele additie reactie van het eiwitten
3. hydrofobe interacties tussen microtiterplaat en de apolaire residuen van eiwitten
4. hydrofiele interacties tussen microtiterplaat en de polaire residuen van eiwitten

Waarom is wassen tussen bepaalde stappen zo belangrijk?

Waarom moet er na coating een blocking stap plaatsvinden?

1. De bodem wordt niet helemaal bedekt door coatingeiwit. Dit kan leiden tot binding van eiwitten (afkomstig van volgende stappen) op plaatsen tussen de coatingeiwitten . Daarom blocken we die plaatsen voor we beginnen aan de volgende stap.
2. Met de blockingstap zorg je dat het coatingseiwit enkel aan eiwitten binden waarin wij geïnteresserd zijn.
3. De coatingeiwitten hebben een extra stof nodig om te kunnen binden aan een ander eiwit
4. Geen van bovenstaande antwoorden is correct. Vraag maar aan de docent.

Welke stoffen worden gebruikt om te blocken?
Zoek op internet.

Hoe heten het meest gebruikte enzym en substraat?

met b.h.v. HRP enzym

De oxidatie van TMB zorgt ervoor dat de oplossing van kleurloos naar...welke kleur gaat?

Hoe donkerder het blauw, hoe...

Hoe komt het dat de stopoplossing de enzymatische reactie kan stoppen?

1. De stopsolutie gaat een reactie aan met het substraat waardoor het substraat niet meer beschikbaar is voor het enzym
2. De stopsolutie verlaagt de pH
3. De stopsolutie zorgt ervoor dat het substraat neerslaat
4. Geen van bovenstaande antwoorden is juist. Vraag de docent waarom?

Je hebt nu de algemene principes van ELISA onder de knie. Ga verder met een andere kleur.

Wat voor type ELISA is dit? En waarom?

Ok, je weet nu dat dit een s******* ELISA is, maar is het een direct of een indirecte?en waarom?

Zoek een afbeelding van een indirecte sandwich ELISA

vlab.amrita.edu

Wie het aandurft:

https://www.nature.com/articles/srep16092

Een artikel dat gaat over de detectie van bacteriën in voeding mbv ELISA

Hebben ze in voor dit artikel een directe of indirecte sandwich ELISA?

Lees op de volgende website de voor en nadelen van de sandwich ELISA

https://www.bio-rad-antibodies.com/elisa-types-direct-indirect-sandwich-competition-elisa-formats.html

Tekst

Voordeel

Nadeel

Economisch

Hoge gevoeligheid

Flexibel

Kruisreactivieit 

Duurt langer

Kun je uitleggen waarom '2 antilichamen een voordeel kan zijn?

Deze grafiek is het resultaat van welk type ELISA?

1. Sandwich ELISA
2. Competitieve ELISA

Leg uit waarom dat deze grafiek het resultaat is van dat type ELISA

Wat voert hier competitie met wat?

Er zijn nog andere manieren van competitieve ELISA:

Welke van deze
ELISA's is
indirect?

Welke van deze ELISA's is indirect?

1. Alleen de 2de
2. Ze zijn allemaal niet indirect
3. De 2de en de 3de
4. Alleen de 4de

Wat gebruikt men bij een indirecte ELISA wel en bij een directe niet?

Raadpleeg de volgende site en lees over directe en indirecte ELISA:

https://www.bio-rad-antibodies.com/elisa-types-direct-indirect-sandwich-competition-elisa-formats.html

Voordelen directe ELISA

Voordelen indirecte ELISA

Snel

Minder kans op fouten in de procedure

Hoge sensitiviteit 

Economisch voordelig

Grote flexibiliteit