LLS3.3 Periode 2, les 5

• Microbiologie
• MBO
• Studiejaar 3

Microbiologie

Periode 2, les 5

LLS3.3 

11 december 2020

De vorige les

Immunochemische technieken: ELISA

Wat is het verschil tussen een antistof en een antigeen?

Deze les

DNA-technieken: pcr + sequencing

Wat weet je al over de PCR-techniek?

PCR

Polymerase Chain Reaction (Polymerase-kettingreactie) 

Stel, er wordt een haar gevonden van een inbreker -> weinig DNA 

Met de PCR-techniek kunnen we DNA vermenigvuldigen en aantonen  

PCR

Met de PCR-techniek kunnen we DNA vermenigvuldigen en aantonen 

Nauwkeurig verwarming- en koelapparaat

Drie stappen (cyclus)

Vermenigvuldiging van DNA

Denaturatie

Verwarmen van het monster naar ca. 95 graden 

Dubbele streng DNA zich splitst in twee enkele strengen

Het verhitten verbreekt de waterstofbinding tussen basen waardoor de dubbele streng uit elkaar gaat

Hybridisatie

Verlagen temperatuur (50-65 graden) 

Hierdoor kunnen de primers hechten aan de twee enkelvoudige DNA-strengen

Primer = klein stukje DNA dat als startpunt wordt gebruikt bij de  reactie. Past precies op de enkelvoudige streng DNA! 

Verlenging

Temperatuur wordt opgevoerd (72 graden) 

Zodra de primer zich gehecht heeft gaat het Taq polymerase het DNA verlengen 

Resultaat: twee dubbele DNA-strengen 

Taq polymerase komt van de bacterie Thermus aquaticus 

De drie stappen

Cyclussen

30 cycli voor genoeg kopieën 

Duurt enkele uren

Aantonen DNA 

Real-time of kwantitatieve PCR methode

Primers met 'label' 

Wordt zichtbaar wanneer de primer wordt gebruikt 

Stap 1

Stap 2

Stap 3

Denaturatie

Hybridisatie

Verlenging

Ca. 95 graden

50-65 graden

72 graden 

Dubbele streng splitst

Hechten primers

Verlengen DNA

DNA-sequencen

DNA is opgebouwd uit nucleotiden

DNA-sequencen = Bepalen volgorde nucleotiden in een DNA-molecuul  

CRISPR

• 'DNA knippen' 
  
• Bacteriën beschermen zich tegen vijanden voor de knippen in het virale DNA 
  
• Schaartje kan aangepast worden 
  
• Appels en champignons die niet meer bruin worden 
  
• Hoornvorming bij runderen voorkomen 
  
• Maar, ook kan dit toegepast worden op de mens 

Filmpje 

Netflix -> Explained -> Designer DNA 

Vragen? 

Volgende week

Geen les! Na de vakantie weer

Fijne vakantie!