Western Blot

DNA en eiwitten
1 / 24
next
Slide 1: Slide
BiologieMiddelbare schoolvwoLeerjaar 6

This lesson contains 24 slides, with text slides.

Items in this lesson

DNA en eiwitten

Slide 1 - Slide

DNA gelelectroforese

Slide 2 - Slide

DNA gelelectroforese

Slide 3 - Slide

Eiwitten scheiden
Zou dat ook kunnen met gelelectroforese?

Slide 4 - Slide

PAGE
PolyAcrylamide Gel Electroforese

Slide 5 - Slide

SDS PAGE
SDS: sodium dodecyl sulfate
• Denatureert eiwitten
• Verbreekt S-bruggen
• Geeft eiwitten een (uniforme) negatieve lading

Slide 6 - Slide

2D gelelectroforese
Eiwitten scheiden op basis van twee eigenschappen
- molecuulmassa (SDS PAGE)
- isoelectrisch punt (isoelectric focusing)

Slide 7 - Slide

Slide 8 - Slide

Eppstein Barr Virus (EBV)
Acute fase: virus wordt actief gerepliceerd
Latente fase: virus houdt zich 'schuil'

Slide 9 - Slide

EBV geinfecteerde cellen
Whole protein cell lysis: alle eiwitten uit de geinfecteerde cel

U = latente fase
I = acute fase

Slide 10 - Slide

EBV en complement
Complement systeem: eerste afweermechanisme tegen indringers
Complement eiwitten binden virus
- virus kan niet meer aan cel binden (= virus inactivatie)
- virus wordt beter herkend door T cellen (= opsonisatie)

Slide 11 - Slide

C4b: complement eiwit
C4b bindt EBV: opsonisatie

Slide 12 - Slide

C4b
Molecuulmassa: 192 kDa

Alpha keten: 75 kDa
Bèta keten: 85 kDa
Gamma keten: 32 kDa

Slide 13 - Slide

Western Blot van C4b

Slide 14 - Slide

C4b bindt EBV: virus wordt opgeruimd
Toch infecteert EBV 90% van de bevolking... Hoe dan?

Slide 15 - Slide

Hypothese: EBV bevordert C4b afbraak

Slide 16 - Slide

C4b afbraak

Slide 17 - Slide

C4b afbraak

Slide 18 - Slide

Aantonen C4b afbraak
• Sample met EBV & C4b (+ controle!)
• Co-factoren nodig (Factor I)
• Western Blot voor C4b
• Verwachte bandjes: 70 kDa, 46 kDa, 25 kDa, 15 kDa

Slide 19 - Slide

Bevordert EBV de afbraak van C4b?

Slide 20 - Slide

Conclusie
Deze resultaten laten zien dat C4b in aanwezigheid van EBV (gedeeltelijk) afgebroken wordt.
Meer onderzoek is nodig of gp350 daarvoor verantwoordelijk is.

Slide 21 - Slide

Technieken
DNA gelelectroforese

SDS PAGE
2D gelelectroforese
Western Blot

Slide 22 - Slide

Is dat het enige dat EBV kan?
Nee natuurlijk niet!

Slide 23 - Slide

Slide 24 - Slide