Western Blot

• Biologie
• Middelbare school
• vwo
• Leerjaar 6

DNA en eiwitten

DNA gelelectroforese

DNA gelelectroforese

Eiwitten scheiden

Zou dat ook kunnen met gelelectroforese?

PAGE

PolyAcrylamide Gel Electroforese

SDS PAGE

SDS: sodium dodecyl sulfate
• Denatureert eiwitten
• Verbreekt S-bruggen
• Geeft eiwitten een (uniforme) negatieve lading

2D gelelectroforese

Eiwitten scheiden op basis van twee eigenschappen
- molecuulmassa (SDS PAGE)
- isoelectrisch punt (isoelectric focusing)

Eppstein Barr Virus (EBV)

Acute fase: virus wordt actief gerepliceerd
Latente fase: virus houdt zich 'schuil'

EBV geinfecteerde cellen

Whole protein cell lysis: alle eiwitten uit de geinfecteerde cel

U = latente fase
I = acute fase

EBV en complement

Complement systeem: eerste afweermechanisme tegen indringers
Complement eiwitten binden virus
- virus kan niet meer aan cel binden (= virus inactivatie)
- virus wordt beter herkend door T cellen (= opsonisatie)

C4b: complement eiwit

C4b bindt EBV: opsonisatie

C4b

Molecuulmassa: 192 kDa

Alpha keten: 75 kDa
Bèta keten: 85 kDa
Gamma keten: 32 kDa

Western Blot van C4b

C4b bindt EBV: virus wordt opgeruimd

Toch infecteert EBV 90% van de bevolking... Hoe dan?

Hypothese: EBV bevordert C4b afbraak

C4b afbraak

C4b afbraak

Aantonen C4b afbraak

• Sample met EBV & C4b (+ controle!)
• Co-factoren nodig (Factor I)
• Western Blot voor C4b
• Verwachte bandjes: 70 kDa, 46 kDa, 25 kDa, 15 kDa

Bevordert EBV de afbraak van C4b?

Conclusie

Deze resultaten laten zien dat C4b in aanwezigheid van EBV (gedeeltelijk) afgebroken wordt.
Meer onderzoek is nodig of gp350 daarvoor verantwoordelijk is.

Technieken

DNA gelelectroforese

SDS PAGE
2D gelelectroforese
Western Blot

Is dat het enige dat EBV kan?

Nee natuurlijk niet!