Practicum 2 Alkalische fosfatase

• scheikunde
• MBO
• Studiejaar 1

ES-complex staat voor enzym-substraatcomplex

Substraat

Enzym

ES-complex

Product

Wat is een kenmerk van een enzym

1. katalysator
2. Eiwit
3. activeren organen, weefsel en cellen
4. Alle bovengenoemde

De snelheid van een enzymreactie is afhankelijk van

1. temperatuur, substraatconcentratie, energie
2. temperatuur, substraat-enzymcomplex
3. temperatuur, zuurgraad en enzymconcentratie
4. enzymconcentratie en temperatuur

Te onderzoeken monster

• serum monster --> heeft AF enzym 
• serum vs plasma 

       coagulatiefactoren interfereren met sommige analyses.

       plasma = heeft stollingseiwitten

                        = bloedvloeistof zonder cellen.

       serum   = plasma zonder stollingseiwitten. Dus bloedplasma                             laten stollen en centrifugeren.

       

Alkalische fosfatase

rol van activator

Activator:

Mg²⁺

Analyse

PNP = substraat 

MgCl₂ = activator (Mg²⁺) 

AMP-buffer = pH constant te houden (pH 10,7)

AF = enzym 

Para-nitrofenol = product (meten 400 nm)

Doel van analyse

Graden Celsius

0 

+/- 22 

37

40

50

Iedere LL in projectgroep voert deze analyse uit bij één van de vijf temperaturen.

Verzamel data en bepaal de optimale temperatuur waar de enzymactiviteit het hoogst is (Excel grafiek)

Kalibratielijn 

• Spectrofotometer (Multiscan) bij 400 nm 
• Standaardreeks maken van p-nitrofenol (het product)
• enzymactiviteit bekend bij standaarden (U/L)

       U = units (aantal enzym) 

       1 U enzym zet 1 micromol substraat om per minuut 

       

Kalibratielijn 

1 mL	50 U/L
2 mL	100 U/L
4 mL	200 U/L
6 mL	300 U/L

Afsluiting

Voorbereidend meetrapport AF - zie Teams voor invulblad 

Meetrapport na praktijk inleveren (Deadline Vr 30 April)

Linreg grafiek maken (zie Teams voor Linreg sheet) 

Herinnering: vandaag laatste dag om MR titratie in te leveren. Telt mee als projecttaak en praktijkcijfer.